Purpose: Orbitrap Fusion Tribrid과 MSn Library를 이용하여 Metbolite의 구조를 밝히고자 한다.
Methods: UHPLC와 Orbitrap Fusion을 연동해서 Global Profiling과 MSn을 이용하여 구조적인 해석을 동시에 하고자 한다.
Results: UHPLC의 Timescale(2-3 second FWHM)내에, 11개의 성분을 Ion Trap HCD MS2와 각 MS2-MS3(top2)-MS4(top2)의 Ion Tree 데이터를 10 Cycles Time 이내로 분석할 수 있다.

Metabolite의 구조적인 확인은 대사체학 연구에서 중요한 과제에 해당된다. 다양한 Dissociation방식의 MSn은 성분을 확인하고 구조적인 해석을 하는데 중요한 정보를 제공한다. 그리고 구조이성질체와 같은 동일한 분자량의 이성질체들을 구분하고 확인하는데 절대적인 역할을 하고 있다. 고분해능과 고정확도(HR/AM)가 결합된 MSn데이터는 대사체학 연구에서 생물학과 관련된 성분이면서 미지시료인 것을 확인하는데 매우 효과적이다. 하지만, 현재 플랫폼에 따르면, MS는 UHPLC와 연동해서 Biological Sample과 같은 실험적 어려움이 많이 따르는 분야에서는 스피드면에서 적합하지 못한 면이 있었다. 이에 Thermo사에서는 새롭게 출시된 세계 최고의 HR/AM MS인 Orbitrap Hybrid 장비를 개발하여 UHPLC와 연동시켰고, MSn Library를 이용하여 Endogenous Metabolite를 쉽고 빠르게 확인할 수 있는 새로운 플랫폼을 제시했다.

Methods Sample Preparation 성인 남성으로부터 얻은 소변 샘플을 물로 1/10배 희석했고 3kD MWCO 필터로 처리했다. 혈장 샘플을 위해서, Cold Methanol과 원심분리기를 이용하여 35°C에서 centrifugal evaporation에 의해 단백질을 제거했다. 잔여물을 MeOH/Water(1/9)로 녹여서 3kD MWCO 필터로 처리했다.
Liquid Chromatography UHPLC 분리는 Hypersil GOLD RP C18와 Dionex Ultimate 3000 HPG (High-Pressure Gradient) 펌프를 이용하여 컬럼온도 55°C 에서 450μL/min으로 분리했다. LC 용매는 0.1% FA (A) 과 0.1% FA in MeOH으로 아래와 같은 조건에서 분리했다.

FIGURE 1. Schematic of Orbitrap Fusion Tribrid^TM Mass Spectrometer