Fluorescence spectrometer, Limit of Detection, LOD, Limit of Quantitation , LOQ
형광에서의 검출 한계(Limit of Detection, LOD)란 시료가 없는 상태에서 나오는 바탕 신호와 시료에서 나오는 형광을 구분할 수 있는 최소의 시료 농도로서 형광 분광광도계의 성능 평가 요소 중 가장 중요한 부분 중 하나이다. 그러나 최소 검출 가능한 시료 농도 결정에 대하여 U.S. Pharmacopeia는 검출 한계 외에 정확하고 정밀하게 받아 들여 질 수 있는 정량 가능한 최소 농도인 정량 한계(Limit of quantification, LOQ) 또한 제시해 주어야 함을 밝혔다.1)
본 실험에서는 ASTM Committee E-13 on Molecular Spectroscopy (ANSI/ASTM E579-04)2)의 방법을 이용해서 Vitamin B2에 대한 자사의 FS-2 형광 분광 광도계의 검출 한계(LOD)와 정량 한계(LOQ)를 구하였다.
1. FS-2 형광 분광 광도계
2. 3차 증류수
3. FluoroMaster Plus Software
4. 형광 셀 (광 경로 10mm)
5. Vitamin B2 (Riboflavin) [Sigma-Aldrich]
| Ⅰ. 검출 한계 측정 |
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| 1. |
증류수를 용매로 10 ppb 농도의 Vitamin B2 용액을 제조한다. |
| 2. |
형광 셀에 증류수를 담아 wave scan mode에서 아래 조건에 따라 형광을 측정 한다. |
| 3. |
동일한 Cell을 세척 한 후, 10 ppb의 Vitamin B2 용액의 형광을 측정한다. |
| 4. |
위 과정을 10 회 반복하여 바탕 신호와 시료 신호를 측정한다. |
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| Ⅱ. 정량 한계 측정 |
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| 1. |
정량 가능한 최소 농도를 확인하기 위하여 10 ppb Vitamin B2 용액을 1.5, 2, 3, 5 ppb 농도로 희석 한다. |
| 2. |
wave scan mode에서 증류수 및 각 농도별 용액을 3회씩 반복 측정 하여 검량 곡선을 그린다. |
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