Nano Stick, PDA UV-Vis Spectrophotometer, BSA, Quantification

단백질 정량은 생화학의 가장 기본적인 실험 중의 하나이다. 단백질 정량법은 다양하지만, 대부분의 실험에서 UV-Vis Spectrophotometer가 사용된다.

단백질은 모든 생물의 몸을 구성하는 고분자 유기물로, 수많은 아미노산(amino acid)의 연결체이다. 단백질을 구성하는 아미노산 중에서 Aromatic ring을 가지는tryptophan, tyrosine 등이 280 nm 부근의 자외선을 흡수하므로, 이 흡광도를 측정하여 단백질의 농도를 구할 수 있다. 이러한 아미노산 잔기들의 양은 단백질에 따라 매우 다양하며 그 수에 따라 단백질의 흡광계수(extinction coefficient)가 달라진다. 또한 단백질 시료의 A280값은 그 농도와 비례한다.

Nano Stick은 신코에서 출시한 Micro volume cuvette으로, 미량의 핵산, 단백질 시료 측정에 최적화된 cuvette이다. 0.5 mm와 0.2 mm pathlength 선택이 가능하며, 최소 1 ul를 사용하여 고농도의 시료를 희석없이 측정할 수 있다. 또한 Beam height는 15 mm와 8.5 mm 두 종류가 있으며 10 x 10 mm standard cuvette과 같은 사이즈로 기존의 모든 UV-Vis spectrophoto- meter에서 사용이 가능하다. 소량의 시료를 사용하여 측정할 수 있으므로 시료의 소모가 적으며, 샘플링 및 세척이 용이하다.

이번 실험에서는 신코의 Nano Stick을 이용하여 최소 0.1 mg/ml 에서 고농도까지의 BSA 정량 실험을 수행하였다.

Nano Stick은 Micro volume cuvette으로 자성이 있는 두 개의 plate로 구성되어 있다 (Figure 1). 두 개의 plate를 합치면 일반적인 standard cuvette과 같은 사이즈가 되어 사용자가 보유하고 있는 기존의 UV-Vis spectrophotometer의 cell holder에서 사용 가능하다. Spectrophotometer의 빛은 Nano Stick의 시료 window 부분을 통과함으로써 시료의 흡광도를 측정하게 된다 (Figure 2).

Figure 1. Nano Stick 샘플링

Figure 2. Nano Stick 빔 경로

• 단백질 표준 시료(Bovine serum albumin : BSA)
• Deinoized water
• S-3100 PDA UV-Vis Spectrophotometer
• LabPro^® Plus Software
• Nano Stick (0.5 mm, 0.2 mm pathlength)