1. MMDF 기능을 이용하여 Parent Drug과 관련되지 않은 다량의 Background를 제거하여 Metabolite들을 검색하는데 소요되는 분석시간을 단축시켰다는데 큰 의미가 있다. Figure 2와 같이 Parent Drug과 가능성 있는 GSH와 결합된 Metabolite들이 분포되어있는 구역을 drag만 해도 자동으로 관련성 없는 Mass Peak들이 제거된다. 그 결과, Figure 3과같이 눈에 띄게 Metabolite들을 규명하는데 활용할 수 있었다.

[Figure 2 : Multiple Mass Defect Filter dialogue box in Metworks 1.2 . This dialogue box can be accessed by clicking on "Tools" → "Multiple Mass Defect Filters..."]

[Figure 3 : Base peak chromatograms of the full scan data comparing the unfiltered chromatogram to the mass defect filtered chromatogram]

2. 항우울제로 사용되는 Nefazodone의 경우 Cl원소를 하나 포함한 특징 있는 구조를 가지고 있다. Nefazodone의 Metabolites 경우, Cl을 포함한 Backbone은 유지되면서 다양한 Site에서 변형이 일어날 것으로 예상되기 때문에 Cl을 포함한 모든 Compound들을 검색하는 것이 실험 결과에서 Metabolite들을 찾아내는데 주요 관건이 될 수 있다. 따라서, 일반적으로 Cl의 경우 1.99705Da 만큼 차이를 보이면서 동시에 0.32의 Isotopic Abundance Ratio의 차이를 보이는 원소의 특징이 있어 Figure 4에서와 같이 Isotope Search 기능을 이용하여 정확하게 Cl을 가지는 모든 Compound들을 자동으로 검색하여 수많은 데이터 속에서 의미 있는 Compound들을 확인 할 수 있었다. (Figure 4, 5)

[Figure 4 : Parameters for configuration of the isotope search]

[Figure 5 : Isotope search results showing glutathione conjugates containing a chlorine isotope]

3. 이처럼 MMDF로 처리한 결과에서 Isotope Search를 할 경우, 복잡한 데이터 속에서 빠른 시간내 GSH와 결합된 Metabolite들을 확인할 수 있었다. Figure 6과 같이 초고정확도의 MS, MS2, MS3 데이터를 바탕으로 13.6분에 검출된 Compound들이 GSH와 결합된 Metabolite임을 명확하게 확인하였다. (Figure 6)

[Figure 6 : Full scan and product ion mass spectra of the glutathione conjugate at 13.60 minutes]

복잡한 혼합물 속에서 GSH와 결합된 Metabolite들을 빠른 시간 내 확인하기 위한 접근으로 LTQ Orbitrap과 MetWorksTM 소프트웨어를 이용하였다. 관심 있는 Metabolite들을 선택적으로 MSn 하기 위한 방법으로 데이터를 MMDF(Multiple Mass Defect Filters) 기능을 이용하여 전 처리한 뒤, Isotopic Data Dependence 기능을 이용하여 실험자가 보다 연구하기 편리하게 구성되어있으며, 또한 무엇보다 손쉽게 정성 분석을 할 수 있다. 또한 초고정확도의 Full Scan과 MSn 데이터는 GSH와 결합한 Metabolite들의 구조적인 정보를 보다 정확하게 함께 제공하는데 큰 기여를 하였다.