Objectives: 인간의 식중독 원인 병원균인 Listeria 균은 각 그룹이 매우 유사한 단백질 패턴을 보인다. 식중독 균의 빠르고 정확한 동정은 식품 안전에 있어 필수적이므로 유사한 Listeria 종의 분화를 구별할 수 있는 미생물 동정 방법이 요구된다. 본 연구는 MALDI-TOF MS(Biotyper)를 통해 Listeria 균의 빠르고 정확한 동정에 목적이 있다.
	Methods: 서로 매우 유사한 8종의 Listeria 균주를 배양 후 Ethanol/Formic acid 추출법으로 추출하여 사용하였다. 이 균주들은 MALDI Biotyper로 동정하였고 reference로 16S rRNA gene sequencing 를 이용하여 동정결과를 비교 확인을 하였다.
	Results: 8종의 Listeria 50개 균주는 MALDI Biotyper의 개선된 데이터베이스를 통해 모두 정확하게 동정되었으며, 각 동정 결과는 매우 재현성 있는 결과 값을 가지며 신뢰성 있는 동정 결과를 나타내었다.
	Conclusion: 병원균인 Listeria는 각 종들이 매우 유사한 단백질 패턴을 가지고 있어 정확하고 신속한 동정이 요구된다. MALDI Biotyper는 이러한 Listeria에 있어서 개선된 데이터베이스를 구축하여 빠르고 신뢰성 있는 동정 결과를 나타낼 수 있었다.

Listeria 속은 계통발생학적으로 네 가지 그룹으로 나뉜다:
L. fleischmannii, L. grayi, L. weihenstephanensis, 및 L. monocytogenes group 은 L.monocytogenes, L. ivanovii, L. innocua, L. welshimeri 와 L. seeligeri에 가장 관련이 있는 그룹이다.

Fig1. A dendrogram showing the relation of the four Listeria spp. groups based on mass spectra.

L. monocytogenes 그룹의 종들은 서로 밀접하게 관련되어 있으며 표현형 및 화학 반응뿐만 아니라 16S rRNA 유전자 서열에서조차 약간의 차이만을 보인다. 또한, 이들은 몇 가지 특징적인 피크를 가지기는 하지만 그 외에는 매우 유사한 질량 스펙트럼을 갖는다.

Fig2. Listeria spp. showing very similar profile mass spectra but few characteristic peaks.

Listeria 균주 중 L. monocytogenes 와 L. ivanovii 만이 병원균 성질을 보인다. 그러므로 Listeria 균의 신속하고 정확한 식별은 식품의 적절한 관리 및 제어를 위해 필수적이라고 할 수 있다.

MALDI-TOF MS에 의한 정확하고 빠른 데이터 수집 및 해석 속도는 식품 가공, 품질 관리 및 질병의 진단, 미생물의 식별을 위한 중요한 도구로 쓰일 수 있게 하므로, MALDI Biotyper를 통해 신뢰성 있는 Listeria 종의 동정은 매우 중요하다.

	Listeria 균주는 37℃, Columbia 5% Sheep Blood agar 배지에서 배양하였다. (BD, Heidelberg, Germany)
	균주는 배양 후 하루 뒤 사용하였고, Ethanol/Formic Acid standard extraction method로 추출하였다.
	질량 스펙트럼은 microflex LT(Bruker Daltonik, Bremen, Germany)를 사용하여 얻었으며, MALDI Biotyper Compass 소프트웨어로 동정하였다.
	모든 균주의 종 동정결과는 각 종의 특정 peak을 통해 얻었고 (Fig.3), 16S rRNA 유전자 염기서열을 통해 확인하였다.
	L. monocytogenes와 L.innocua 사이에는 V9 지역에서 단 세 개의 single pair 만이 차이가 나며, 이것이 그들을 구분해 주는 지표가 된다 (Fig.4).
	Fig.3 Characteristic Listeria Peaks taken from B. Barbuddhe et al. 2008 ASM.
	Fig.4 Three distinct single base pair differences between L. monocytogenes and L. innocua in the V9 region.