Multi-Stick, PDA UV-Vis Bio Spectrophotometer, dsDNA

Multi-Stick (Figure 1)은 ㈜신코에서 출시한 UV-Vis Bio Spectrophotometer인 Nano-MD의 multi micro volume cuvette으로, 미량의 핵산, 단백질 샘플 측정에 최적화된 cuvette이다. 한 번에 최대 8 개의 샘플 측정이 가능하며 최소 2.5 μl를 사용하여 고농도의 샘플을 희석 없이 측정할 수 있다는 장점을 갖고 있다. 또한 소량의 샘플을 사용해 측정할 수 있으므로 샘플의 소모가 적고, 샘플링 및 세척이 용이하다.

본 실험에서는 PDA UV-Vis Bio spectrophotometer와 Multi-Stick을 이용하여 dsDNA의 농도를 측정하고자 한다.

dsDNA의 농도는 nucleotide가 흡광하는 260 nm에서의 흡광도를 이용하여 계산할 수 있다. 이 때 320 nm에서 흡광이 발생하기도 하는데 이는 DNA가 아닌 용매에 녹아 있는 phenolic compound에 의한 영향으로 이를 제거해 주어야 한다. 이를 바탕으로 dsDNA의 농도는 320 nm에서 baseline correction했을 때 260 nm에서의 흡광도를 이용하여 다음 식을 통해 얻을 수 있다.

[dsDNA] (ng/μL) = A260 x 50 x factor

A₂₆₀은 260 nm에서 흡광도를 말하며 50은 A₂₆₀이 1일 때 dsDNA의 농도를 말한다. Factor는 희석배수 혹은 pathlength를 보정해주는 값을 말하며 Multi-Stick의 경우 pathlength가 0.5 mm 이므로 10 mm standard cuvette을 이용했을 때 보다 흡광도가 20 배 낮게 나타나 이를 보정하기 위한 factor로 20을 사용한다.

Figure 1. (a) Multi-Stick accessory, (b) 시료를 점적하는 방법