 |
 |
 |
 |
|
| |
 |
|
| |
| ´Ü¹éÁúü¸¦ ´ë»óÀ¸·Î ÇÏ´Â ÇÁ·ÎÅ×¿È ºÐ¼®Àº ºÐ¸®, µ¿Á¤, Á¤·®ºÐ¼® »Ó¸¸ ¾Æ´Ï¶ó ºÐ¼® µ¥ÀÌÅ͸¦ ¸ð¾Æ¼ Á¤¸®ÇÏ´Â ÀϱîÁö Á¾ÇÕÀû °üÁ¡À¸·Î ÁøÇàµÈ´Ù. ÀÌ·± ÇÁ·ÎÅ׿Ⱥм®¿¡ ÀÖ¾î °¡Àå ÀϹÝÀûÀÌ°í °íÀüÀûÀÎ ¹æ¹ýÀ¸·Î´Â 2DE¿¡ ÀÇÇØ ºÐ¸®µÇ°í ¿°»ö(Staining) µÇ¾î ¸Å¿ì °¡½ÃÀûÀÎ °á°ú¸¦ Á¦°øÇÏ´Â ¹æ¹ýÀÌ ÀÖ´Ù. ¿©±â¼ È®ÀÎµÈ °¢°¢ÀÇ ´Ü¹éÁú SpotÀº ±× ¾ç¿¡ µû¶ó Á¤·®È µÉ ¼ö ÀÖ°í, È¿¼ÒºÐÇØ ÈÄ¿¡ Áú·®ºÐ¼®¹ýÀ» ÅëÇØ È®À뵃 ¼ö ÀÖ´Ù. ±×·¯³ª °³ÀÎÀÇ ±â¼ú¿¡ µû¸¥ °á°úÄ¡ÀÇ ¿ÀÂ÷°¡ Å©°Ô ³ªÅ¸³ª¹Ç·Î ÀçÇö¼º ÀÖ´Â 2DE À̹ÌÁö¸¦ ¾ò°í ½Ã·á°£ Â÷À̸¦ ¾Ë¾Æ³»±â À§Çؼ± Á¤¹ÐÇÏ°í ¼÷·ÃµÈ ±â¼úÀÌ ÇÊ¿äÇÏ´Ù. ¹«¾ùº¸´Ù 2DE´Â 25³âÀÌ ³ÑÀº ±â¼úÀÌ°í ¸¹Àº ´Ü¹éÁúÀ» µ¿½Ã¿¡ Á¤·®ºÐ¼® ÇÒ ¼ö ÀÖÀ¸¸ç, ¸¹Àº ´Ü¹éÁúµéÀÌ È®Àεǰí ÀÖÁö¸¸ °°Àº ´Ü¹éÁúÀÌ ¹Ýº¹ÀûÀ¸·Î È®ÀεǴ °æ¿ì°¡ ¸¹¾Æ µéÀÌ´Â ½Ã°£°ú ³ë·Â¿¡ ºñÇØ ±×¸® ¸¹Àº µ¥ÀÌÅ͸¦ ¾ò´Â µ¥´Â ´Ù¼Ò ÇѰ谡 ÀÖ´Â ¹æ¹ýÀÌ´Ù. |
| |
|
| |
 |
| |
|
| ¹Ý¸é¿¡ ¡°Shotgun Approach" (Figure 1)°¡ ¿¬±¸µÇ¸é¼ ±âÁ¸ÀÇ º¹ÀâÇÑ ´Ü¹éÁúü¸¦ 2DE¸¦ °ÅÄ¡Áö ¾Ê°í TrypsinÀ̳ª Lysine µîÀ¸·Î Digestion ½ÃŲ ÈÄ, LC/ESI-MS/MS¸¦ ÀÌ¿ëÇÏ¿© ¿©±â¼ ¾òÀº µ¥ÀÌÅÍ·Î Çѹø¿¡ »ó´ë Á¤·®ºÐ¼®°ú ÇÔ²² Sequence ±îÁö °¡´ÉÇÏ°Ô µÇ¾ú´Ù. ÀÌ·Î ÀÎÇØ ÇÁ·ÎÅ׿Ⱥм® ¹æ¹ýÀº ¼öÀÛ¾÷ÀÌ ¸¹°í ÇÑÁ¤ÀûÀÎ µ¥ÀÌÅ͸¦ ¾ò´ø 2DE¿¡¼ ÀÚµ¿ÈµÈ LC/ESI-MS/MS·Î ºÐ¼®¹æ¹ýÀÌ ¿Å°Ü°¡´Â Ãß¼¼·Î Á¢¾îµé¾ú´Ù. LC/ESI-MS/MS¸¦ ÅëÇØ º¹ÀâÇß´ø ÇÁ·ÎÅ׿Ⱥм®ÀÌ °£ÆíÇϰí ÀÚµ¿ÈµÊ°ú µ¿½Ã¿¡ Ãʰí¼Ó ÇÁ·ÎÅ׿Ⱥм®ÀÌ °¡´ÉÇÏ°Ô µÈ °ÍÀÌ´Ù. |
| |
|
| |
 |
| |
ÀÌ¿¡ ¹ß¸ÂÃß¾î ThermoFinnigan¿¡¼´Â LC/ESI-MS/MS¿¡ ¡°Shotgun Approach"¿Í MudPIT(Multi Dimentional Protein Identification Technology)À» µ¿½Ã¿¡ Àû¿ëÇÑ ½Ã½ºÅÛ (Figure 2)À» ÀÌ¹Ì 3³â ÀüºÎÅÍ ½ÃÀå¿¡ Ãâ½ÃÇÏ°í ±¹³»¿¡¼µµ ±× ÀÀ¿ëÀÌ È°¹ßÈ÷ ÁøÇàµÇ°í ÀÖ´Ù. ÀÌ´Â ÀÚµ¿ÈµÈ 10 Port-Switch Valve¿Í µÎ°³ÀÇ Micro Pump¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© ÇѰ³ÀÇ SCX Column°ú µÎ°³ÀÇ RP ColumnÀ¸·Î Delay-Time ¾øÀÌ Á¤ÇØÁø ½Ã°£ ¾È¿¡ º¸´Ù ¸¹Àº ProteinÀ» ºÐ¼®ÇÏ´Â ½Ã½ºÅÛ (Figure 2) ÀÌ´Ù.
|
|
|
|
 |
|
 |
|