Sample Preparation
bullet Chicken ovalbumin (1mg, Sigma) reduced alkylated digested (overnight with trypsine in 25mM Ammonium Bicarbonate buffer (pH~ 8) at 37℃.)
bullet 200㎕ digest Sample에 PNGase F Solution(3㎕, Roche)을 첨가 incubation (37℃에서16시간동안)
bullet Peptides들로부터Sep-Pak C18 cartridge를 이용하여 해리된 Glycans을 분리한다.
bullet Sep-Pak C18 cartridge에 로딩되어 있는 PNGaseF-digested Sample을 1% Ethanol을 가지고 용리시킨다.
bullet 해리된 Ovalbumin Oligosaccharides를 Porous Graphite Carbon Column(PhyNexus)를 이용하여 정제한다.
bullet Permethylate 시킨다.
   
Mass Spectrometry
모든 MSn 실험은 Nanoelectrospray 이온화 소스를 가지고Direct Infusion방법으로 Thermo Scientific사의 LTQ Velos Pro Linear Ion Trap을 이용하여 결과를 얻었다. 자세한 질량분석기의 파라미터는 Table 1에 그리고 SimGlycan 2.92의 서치 파라미터는 Table 2에 자세히 기술하였다.

[Table 1.] Mass spectrometer settings

[Table 2.] SimGlycan 2.92 search parameters